توضیحات
فصل اول : مقدمه و کلیات
فصل دوم : مروری بر تحقیقات انجام شده
۲-۱- ترمیم شکستگیهای DNA دورشتهای:
۲-۲- مکانیسم ترمیم شکستگی DNA دورشته ای:
۲-۲-۲- اتصال تک رشته (SSA):
۲-۲-۳- سنتز Extended وابسته به اتصال رشته ها (ESDSA):
۲-۳- ساختار نوکلئوتید
۲-۴- پاسخ سلول های داینوکوکوس متعاقب اشعه گاما:
۲-۵- ژن های دخیل در مقاومت بخشی به اشعه:
۲-۶- منابع میکروبی مقاوم به پرتو فرابنفش و پیامدهای درمانی:
۲-۷- فواید اکستریموفیلهای مقاوم در برابر تابش
۲-۷-۱- پیامدهای دارویی اکستریمولیت های مقاوم در برابر تابش
۲-۷-۲- پیامدهای بیوتکنولوژیکی اکستریمولیت های مقاوم در برابر اشعه
۲-۸- محدودیتها و چالشها در دیدگاه پنج ساله
فصل سوم : مواد و روشها
۳-۱- آماده سازی وکتور pGEM-B1 حاوی ژن سنتتیکdr2418-opti
۳-۲- مستعدسازی E.coli DH5a
۳-۳- تراریختی یا انتقال وکتور حاوی ژن سنتتیک به درون سلول مستعد E.coli DH5a
۳-۳-۱- استخراج پلاسمید pGEM-B1 حاوی ژن سنتتیک dr2418-opti
۳-۳-۲- تایید استخراج پلاسمید حاوی ژن سنتتیک با روش آگارز ژل الکتروفورز
۳-۳-۳- آماده سازی نمونهها برای الکتروفورز
۳-۳-۴- رنگ آمیزی DNA در ژل آگارز
۳-۳-۵- تهیه بافر TBE(10X)
۳-۳-۶- طرز تهیه ژل آگارز
۳-۳-۷- هضم آنزیمی وکتور pGEM/dr2418 توسط آنزیم NdeI
۳-۳-۸- هضم آنزیمی وکتور pGEM/dr2418 توسط آنزیم BamHI
۳-۳-۹- تخلیص ژن سنتتیک dr2418 از روی ژل
۳-۳-۱۰- برش پلاسمید pET-21a توسط آنزیم NdeI
۳-۳-۱۱- برش وکتور pET-21a (هضم شده با NdeI) توسط BamHI
۳-۳-۱۲- لیگاسیون وکتور pET-21a و ژن سنتتیک dr2418
۳-۳-۱۳- ترنسفورماسیون pET/ dr2418 در سلول مستعد DH5a
۳-۴- توالییابی ژن سنتتیک در pET-21a
۳-۵- القاء ساختارهای بیانی pET21a-dr2418 توسط IPTG به منظور تولید پروتئین DR2418 دارای برچسب هیستیدین (His-tagged r-dR2418):
۳-۶- ارزیابی پروتئین DR2418 تولید شده به وسیله الکتروفورز در ژل پلی آکریلامید (SDS-PAGE)
۳-۷- یکسان سازی غلظت کلی پروتئینها در نمونه های قبل و بعد از القا جهت انجام SDS-PAGE
۳-۸- شناسائی و تائید پروتئین His-tagged r-DR2418 با روش Western blot
۳-۹- نگهداری و ذخیره باکتریهای مولد پروتئین ِDR2418:
۳-۱۰- بررسی پایداری پلاسمیدها (Plasmid stability Test)
۳-۱۱- خالصسازی پروتئین نوترکیب DR2418 به روش کروماتوگرافی
۳-۱۱-۱- لیز سلولی باکتری E.coli
۳-۱۱-۲- آماده کردن ستون
۳-۱۱-۳- تزریق نمونه و شستشو
۳-۱۱-۴- جدا سازی یپروتئین نوترکیب
۳-۱۱-۴-۱- روش دیالیز
۳-۱۱-۵-۱- رسم منحنی استاندارد
۳-۱۱-۵-۲- تهیۀ محلول برادفورد
۳-۱۱-۶- بازیافت و نگهداری ستون
فصل چهارم : نتایج
۴-۱- غربال کردن کلنی های حاوی pGEM-B1 دارای قطعه DR2418:
۴-۲- غربال کردن کلنیهای E. coli DH5 حاوی pGEM-B1 دارای قطعه
۴-۲-۱- تایید پلاسمیدهای استخداج شده با برش آنزیمی NdeI:
۴-۲-۲- تایید پلاسمیدهای خطی شده حاوی ژن سنتتیک با هضم آنزیمی BamHI:
۴-۳- جداسازی قطعه از روی ژل و فرایند Ligation:
۴-۳-۱- تایید صحت واکنش Ligation ژن در وکتور با روش تعیین توالی:
۴-۴- ترانفسفورم وکتور pET21a حاوی ژن dr2418 به سلول E. coli Origami و ارزیابی بیان پروتئین DR2418:
۴-۵- شناسائی و تائید پروتئین DR2418 با روش Western Blot Wet transfer))
۴-۶- بیان ژن dr2418 در حجم یک لیتر محیط کشت
۴-۷- برسی تخلیص پروتئین بر روی ژل SDS_PAGE:
۴-۸- نتایج سنجش غلظت پروتئین:
فصل پنجم : بحث و نتیجه گیری
ضمیمه:
پیشنهادات:
نقد و بررسی‌ها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.