مطالعه نقش استیله شدن بر ساختار و ویژگی های آمیلوئیدی هورمون انسولین

توضیحات

فصل اول: مقدمه

۱-۱- هورمون انسولین

۱-۱- ۱- ساختار هورمون انسولین

۱-۱-۱-۱- ساختار اول انسولین

۱-۱-۱-۲- ساختار دوم انسولین

۱-۱-۱-۳-  ساختار سوم انسولین

۱-۱-۱-۴-  ساختار چهارم انسولین

۱-۱-۲- سنتز هورمون انسولین

۱-۱-۳-  ترشح هورمون انسولین

۱-۱-۴- اشکال مختلف هورمون انسولین

۱-۱-۵- عملکرد زیستی هورمون انسولین

۱-۱-۶- گیرنده هورمون انسولین

۱-۲- بیماری دیابت قندی

۱-۲-۱- دیابت نوع- I

۱-۲-۱-۱- دیابت آدیوپاتیک

۱-۲-۲- دیابت نوع- II

۱-۲-۳- دیابت حاملگی

۱-۲-۴- عوارض بیماری دیابت

۱-۳- آسپرین

۱-۳-۱- ساز و کار عملکرد آسپرین

۱-۴- تا خوردگی و تجمعات پروتئینی

۱-۴-۱- تجمعات منظم پروتئینی: فیبر آمیلوئیدی

۱-۴-۲- مراحل تشکیل فیبریل ها

۱-۴-۳- پدیده فیبریلاسیون هورمون انسولین

۱-۵- نقش چاپرون ها در جلوگیری از فرآیند توده ای شدن

و فیبریلاسیون پروتئین ها

۱-۵-۱- چاپرون های آلفا کریستالین و بتا کازئین

فصل دوم: مروری بر پژوهش های پیشین

فصل سوم: مواد و روش های تحقیق

۳-۱- مواد مصرفی و رده ی سلولی

۳-۱-۱- مواد مصرفی

۳-۱-۲- رده ی سلولی

۳-۲- تهیه محلول ها

۳-۲-۱- تهیه محلول های مورد نیاز کشت سلول سرطانی

۳-۲-۱-۱- تهیه محلول MTT

۳-۲-۱-۲- تهیه محلول تریپان بلو جهت رنگ آمیزی و شمارش

سلول های زنده و غیر زنده

۳-۲-۱-۳- تهیه محلول SDS-DMF

۳-۲-۲- تهیه ی محلول های پروتئینی

۳-۲-۲-۱- تهیه ی محلول انسولین

۳-۲-۲-۲- تهیه محلول های بتاکازئین و آلفاکریستالین

۳-۲-۳-  تهیه ی محلول های مورد نیاز

۳-۲-۳- ۱-  تهیه محلول بافر فسفات

۳-۲-۳-۲- تهیه ی محلول استوک ANS

۳-۲-۳-۳-  تهیه ی محلول استوک تیوفلاوین T

۳-۲-۳-۴- تهیه محلول استوک کنگورد

۳-۲-۳-۵-  تهیه محلول OPA

۳-۲-۳-۶-  تهیه محلول فلورسامین

۳-۲-۴- تهیه محلول های مورد نیاز ژل الکتروفورز

۳-۲-۴-۱- تهیه محلول آکریل آمید و بیس آکریل آمید

۳-۲-۴-۲-  تهیه محلول ۲۰ درصد SDS

۳-۲-۴-۳-  تهیه محلول ۱۰ درصد آمونیوم پرسولفات (APS)

۳-۲-۴-۴- تهیه محلول بافر تریس ۵/۱ مولار

۳-۲-۴-۵-  تهیه محلول بافر تریس ۵/۰ مولار

۳-۲-۴-۶-  تهیه محلول بافر تانک

۳-۲-۴-۷-  تهیه بافر نمونه X2

۳-۲-۴-۸-  تهیه محلول رنگ آمیزی کوماسی بلو

۳-۲-۴-۹- تهیه محلول رنگ زدای کوماسی بلو

۳-۳- روش های استفاده شده در این پژوهش

۳-۳-۱-  تخلیص آلفا کریستالین

۳-۴- روش های تحقیق

۳-۴-۱- فرآیند استیلاسیون هورمون انسولین پانکراس گاوی با آسپیرین

۳-۴-۲- الکتروفورز ژلی هورمون انسولین استیله و غیر استیله

به منظور بررسی میزان استیلاسیون و تشکیل توده های پروتئینی

با وزن مولکولی بالا

۳-۴-۳- تعیین گروه های آمین آزاد/ غیر واکنش دهنده در هورمون انسولین

۳-۴-۴- مطالعه فلورسانس ذاتی هورمون انسولین در حضور آسپیرین

۳-۴-۵- مطالعه فلورسانس عارضی هورمون انسولین در حضور آسپیرین

۳-۴-۶- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی هورمون انسولین در حضور

آسپیرین با استفاده از آزمون  فلورسانس تیوفلاوین T (ThT) و آزمون

اسپکتروسکوپی سنجش جذبی کنگورد

۳-۴-۷- بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین استیله و غیر استیله

۳-۴-۸-  مطالعه اثر استرس های شیمیایی و فیزیکی در القاء تشکیل

فیبر آمیلوئیدی انسولین استیله و غیر استیله

۳-۴-۹- مطالعه جلوگیری از توده ای شدن هورمون انسولین استیله

و غیر استیله با چاپرون های بتا کازئین و آلفا کریستالین

۳-۴-۱۰- مطالعه ساختار دوم انسولین به روش دو رنگ نمای دورانی

در حضور آسپیرین

۳-۴-۱۱- مطالعه هورمون انسولین به روش دستگاه پراکندگی

پویای نور در حضورآسپیرین

۳-۴-۱۲- مطالعه تغییرات کشش سطحی نمونه های

انسولین استیله و غیر استیله

۳-۴-۱۳- مشاهده ی فیبر آمیلوئیدی پروتئین با دستگاه

میکروسکوپ فلورسانس

۳-۴-۱۴- بررسی فعالیت القا مرگ سلولی انسولین استیله با سنجش MTT

۳-۴-۱۵- آزمون آمار

فصل چهارم: نتایج و بحث

۴-۱- مطالعه استیلاسیون پروتئین انسولین پانکراس گاوی در حضور آسپیرین

۴-۲- مطالعه بررسی استیلاسیون پروتئین انسولین

۴-۳-  بررسی پیدایش گونه های مولکولی با وزن بالای انسولین در حضور آسپیرین

با الکتروفورز ژلی

۴-۴- مطالعه پیدایش گونه های مولکولی مختلف انسولین در حضور آسپیرین

با روش پراکنش پویای نور

۴-۵- مطالعه ساختار دوم پروتئین انسولین استیله به روش دو رنگ نمای دورانی

۴-۶- مطالعه ساختار سوم انسولین استیله با روش فلورسانس ذاتی و محیطی

۴-۷- مطالعه کشش سطحی انسولین نمونه های مختلف انسولینی

۴-۸-  بررسی توده ای شدن پروتئین انسولین بعد از فرآیند استیلاسیون

۴-۹- بررسی تشکیل فیبر آمیلوئیدی پروتئین انسولین در حضور آسپیرین

با روش های اسپکتروسکوپی

۴-۱۰- مطالعه ی میکروسکوپی تشکیل  فیبر آمیلوئیدی به وسیله ی پروتئین

انسولین در حضور آسپیرین

۴-۱۱- مطالعه ی اثر استرس های شیمیایی و فیزیکی بر ساختار و ویژگی های

آمیلوئیدی انسولین استیله و غیر استیله

۴-۱۲-  مطالعه کینتیک توده ای شدن نمونه های مختلف انسولینی

۴-۱۳- جلوگیری از فرآیند توده ای شدن نمونه های مختلف انسولینی

به کمک دو چاپرون مولکولی آلفا کریستالین و بتا کازئین

۴-۱۴- مطالعه ی سمیت توده های پروتئینی انسولین استیله

نتیجه گیری