توضیحات
فصل اول مقدمه
میکروبیولوژی هانسونلا پلی مورفا
مطالعات ژنتیکی
جهش در ژنهای کد کننده آنزیم های پراکسی زومی یا سیتوپلاسمی درگیر در متابولیسم متانول
نقشه ژنتیکی
تولید مثل واسپورزایی
اسپورزایی
پروموتورهای مورد استفاده در سیستم بیانی هانسونلا پلی مورفا RB
HARS
بیان همزمان
ترشح پروتئین های هترولوگ الیگومری و فعال
تولید واکسن نوترکیب
مخمرها به عنوان میکروارگانیسم های تولیدی
ساخت سویه هانسونلا پلی مورفا بیان کننده آنتی ژن HBS
تولید کاست بیانی و وکتور پلاسمیدی
انتقال وکتورهای بیانی به هانسونلا پلی مورفا
جداسازی سویه های نوترکیب
تنظیم متابولیسم متانول
فاکتور محرک رشد کلنی (G-CSF)
ژن gcsf
پروتئین GCSF
عملکرد پروتئین GCSF
فصل دوم مواد و روش ها
میکروارگانیسم های مورد استفاده
محیط های کشت مورد نیاز
پلاسمیدهای مورد استفاده
آنزیم ها و کیت ها
آنتی بیوتیک ها
الکتروفورز افقی محصول PCR و یا نمونه DNA بر روی ژل آگارز
تخلیص محصول هضم آنزیمی با استفاده از کیت تخلیص از ژل آگارز
واکنش لیگاسیون قطعات تخلیص شده
تهیه سلول های مستعد ‘E coli TOPF به روش تیمار با کلرید کلسیم
انتقال پلاسمید به سلول های مستعد
بررسی کلونهای نوترکیب به روش سریع
PCR بر روی کلنی های باکتریایی/مخمری
استخراج پلاسمید در مقیاس کم
استخراج پلاسمید در مقیاس زیاد
الکتروفورز پروتئین بر روی ژل پلی اکریل آمید(SDS-PAGE)
سنتز ژن gcsf
PCR اختصاصی بر روی ژن gcsf
کلون نمودن ژن gcsf در وکتور بیانی هانسونلا
هضم آنزیمی وکتور pGH-gcsf
هضم آنزیمی وکتوربیانی pHan
کلون نمودن قطعه gcsf در وکتور بیانی pHan
بررسی کلون های نوترکیب pHan-gcsf
هضم آنزیمی وکتور pHan-gcsf
کلون نمودن ژن مقاومت به زئوسین در وکتور بیانی pHan-gcsf
PCR اختصاصی بر روی ژن مقاومت به زئوسین
کلون نمودن ژن zeocin در وکتور کلونینگ pGEM-T Easy
بررسی کلون های نوترکیب pGEM-zeo
کلون نمودن ژن مقاومت به زئوسین در وکتور بیانی pHan-gcsf
هضم آنزیمی وکتور pHan-gcsf و pGEM-zeo
کلون نمودن ژن مقاومت به زئوسین در وکتور بیانی تیمار شده با آلکالین فسفاتاز pHan-gcsf
بررسی کلونهای نوترکیب pHan-gcsf-zeocin
انتقال پلاسمید نوترکیب pHan-gcsf-zeocin به سلول هانسونلا پلی مورفا
هضم آنزیمی وکتور بیانی pHan-gcsf-zeocin
الکتروپوریشن سلول های هانسونلا پلی مورفا
تأیید کلونهای نوترکیب هانسونلا با روش Colony PCR اختصاصی ژن زئوسین
بیان پروتئینGCSF در هانسونلا پلی مورفا
کشت سلولهای مخمری
بررسی بیان پروتئین نوترکیب با روش SDS-PAGE
تزریق نمونه پروتئینی به خرگوش
ایمونوبلاتینگ
فصل سوم نتایج
سنتز ژن gcsf
PCR اختصاصی بر روی ژن gcsf
طراحی پرایمر های اختصاصی ژن gcsf
بهینه سازی واکنش PCR برای ژن gcsf
کلون نمودن ژن gcsf در وکتور بیانی هانسونلا
هضم آنزیمی وکتور کلونینگ pGH-gcsf و وکتور بیانی pHan
بررسی کلونهای نوترکیب pHan-gcsf
بررسی کلونها به روش سریع
انجام PCR ژن gcsf بر روی پلاسمید نوترکیب pHan-gcsf
هضم آنزیمی وکتور تأیید شده pHan-gcsf
کلون نمودن ژن مقاومت به زئوسین در وکتور بیانی pHan-gcsf
PCR اختصاصی بر روی ژن مقاومت به زئوسین (Sh ble)
کلون نمودن ژن zeocin در وکتور کلونینگ pGEM-T Easy
تأیید کلون های نوترکیب pGEM-zeocin
بررسی سریع کلونهای نوترکیب
هضم آنزیمی پلاسمید نوترکیب pGEM-zeo با BglII
کلون نمودن ژن مقاومت به زئوسین در وکتور بیانی pHan-gcsf
بررسی کلونهای نوترکیب pHan-gcsf-zeocin
بررسی سریع کلونهای نوترکیب
بررسی کلونها به روش Colony-PCR
برش آنزیمی وکتور نوترکیب pHan-gcsf-zeo
انتقال پلاسمید نوترکیب pHan-gcsf-zeocin به سلول هانسونلا پلی مورفا
هضم آنزیمی وکتور بیانی pHan-gcsf-zeocin و انتقال به سلول هانسونلا
تأیید کلونهای نوترکیب هانسونلا با روش Colony-PCR ژن زئوسین
بیان پروتئینGCSF در هانسونلا پلی مورفا
تأیید پروتئین نوترکیب تولید شده با روش Immuno-Blotting
فصل چهارم :بحث و پیشنهادات
رویکرد کلی پژوهش
نقد و بررسی‌ها
هنوز بررسی‌ای ثبت نشده است.